13. Oligo DNA片段退火后不能连接到载体上是什么原因？

连接反应需要引物的5’磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上，引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上，需要检查载体的酶切效果，需要改善引物退火的条件。SiRNA分子具有特殊的对称结构，退火的难度较大，退火时需要提高退火温度。

14. 一般的合成 Oligo DNA 的 5‘ 和 3‘ 末端有磷酸基团吗？

没有磷酸基团， 5‘ 和 3‘ 末端均为 - OH 基。如需要加磷酸基团，订货时请特别注明，此时需收取磷酸化的费用。

15. Oligo DNA 最长可以合成多少个碱基？

引物越长，出现问题的概率就越大。以每步反应效率为 99% 进行计算，粗略计算合成到 100 个碱基时，目的 DNA 片段的比例便为 0  。 但有些厂家曾报道合成了 150mer 的Oligo DNA片段。三博公司也曾合成过120mer左右的Oligo DNA 制品。但根据我们的经验，要想保证合成DNA 的碱基 90% 正确，Oligo DNA的长度最好不要超过70mer，80mer以上要想保证一个碱基都不错就非常危险了，须十分注意。

16. 如何提高引物的纯度？怎样才能保证 Oligo DNA 的正确性？

· 合成 Oligo DNA 时，选用高纯度级制品；

· 避免使用大于50mer 的长链 Oligo DNA ，最好选用小于 35mer 的合成 DNA 制品。不要超过2OD，60个碱基以上最好不超1OD，国内有一个不好的现象，长链引物要的量都比较大，导致割的条带比较宽，建议您减少OD数，引物遇到的问题可能就会少一些；

· 进行克隆实验时，每次克隆都须进行测序验证，以保证序列的正确性，然后再进行进一步实验，进行蛋白表达实验时，尤其需要注意。  

17. 进行蛋白表达实验数个月不成功，后经测序发现引物处有错误，怎么办？

· 表达实验之前一定要对 DNA 序列进行验证，这是实验的常识；

· 我们可以免费重新合成引物；

· 如进行索赔时，按国际行业惯例，索赔范围限于制品价格范围之内。 

 

18. 如果测序发现引物突变，是否有补偿？

我们可以免费重合一次引物，没有其他补偿或赔偿，不能承担其他连带责任，这是国际行规。原因我们在前面已提到，化学合成准确率（或纯度）不可能达到100%，客户样品的纯度关系也很大，我们总结使用引物错误的概率有1％左右，关于这方面的信息在每个产品说明书里都有事先说明。