引物纯化、稀释、保存
一、引物纯化
◆C18柱脱盐：有人称其为简易反相柱，它对DNA有特异性的吸附，可以被有机溶剂洗脱，但不会被水洗脱，所以能有效地去除盐分。但它不能有效去除比目的片段短的小片段。实际上，它是一种脱盐的作用。这种方法一般不会对普通PCR反应产生影响，但是用于测序、克隆的引物不能使用这个级别。
◆OPC纯化： OPC纯化是根据DNA保护基（DMTr基）和Cartridge柱中树脂间的亲合力作用的原理进行纯化目的DNA片段。OPC法纯化的DNA纯度大于95%。适用于40mer以下引物的纯化。
◆PAGE纯化：PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对DNA片段进行分离，然后从凝胶中回收目的DNA的方法。PAGE纯化法也是一种非常有效的DNA纯化方法，纯化后的DNA纯度大于95%，对长链Oligo DNA (大于50mer)的纯化特别有效。三博远志用PAGE纯化，纯度达98％。
◆HPLC纯化：HPLC纯化是使用高效液相色谱的原理，对DNA片段进行纯化。纯度可以大于99%。主要用于长链和修饰引物的纯化。该法的弱点是成本较高，批量生产效率不高。
二、引物纯化方式
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一、引物纯化方式
应 用
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引物长度要求
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纯度级别要求
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一般PCR扩增
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< 45base
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OPC
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一般PCR扩增
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>45 base
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PAGE
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诊断PCR扩增
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< 40base
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OPC, PAGE
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DNA测序
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20base左右
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OPC
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亚克隆，点突变
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根据实验要求定
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OPC,PAGE,HPLC
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基因构建
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根据实验要求定
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OPC,PAGE,HPLC
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全基因合成
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根据实验要求定
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PAGE
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反义核酸
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根据实验要求定
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PAGE
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修饰引物
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根据实验要求定
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PAGE,HPLC
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三、引物溶解稀释
1．干粉引物溶解稀释方法：
收到引物后，在开启离心管盖前在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟，以防开盖时引物干粉散失。引物保存在高浓度的状况下比较稳定。如果对实验的重复性要求较高，合成的OD数较大，建议分装，避免反复冻融。引物一般配制成10-100pmol/ul(umol/l)。
三博远志的引物在出厂时都标有1OD 相当于多少umol 的计算结果，进行稀释时的引物加水量可以按以下公式计算：
稀释成100pmol/ul 1OD 需加水量（ul）=1OD相当于umol 数×10000
例如，您拿到的引物DNA合成报告单上标有1OD≈0.0035umol ，包装量是1OD/管，如果您希望将引物浓度定为100umol/L，那么只需用35ul无核酸酶的双蒸水将1OD的引物干粉溶解即可。
2．液体引物再稀释可用下列公式：
稀释引物要达到的浓度（pmol/ul）＝母液浓度（pmol/ul）×汲取母液的体积（ul）÷（汲取母液的体积（ul）＋加水量（ul））
四、引物保存
◆干燥制品很稳定，常温下数个月无问题。但为保证万无一失，最好放置于- 20 ℃保存；
◆溶解后的溶液DNA短期内(1～2 周)使用可放置在4 ℃下，长期保存请放置于- 20 ℃；溶解DNA时，请注意使用无菌、无核酸酶的水或TE Buffer；
◆如果对实验的重复性要求较高，合成的OD数较大，建议分装，避免反复冻融；
◆荧光标记引物请避光保存。